Vetitë fizike dhe kimike të ADN-së
| Emri i parametrit | Kuptimi |
| Tema e artikullit: | Vetitë fizike dhe kimike të ADN-së |
| Rubrika (kategoria tematike) | Sport |
1. Denatyrim
Denatyrimi i ADN-së kryhet nën veprimin e faktorëve kimikë (ure, klorur guanidine, acid, alkali) dhe faktorë fizikë (temperaturë). Si rezultat i denatyrimit, struktura sekondare e ADN-së shkatërrohet. Kur të hiqet ndikimi i faktorit denatyrues, struktura sekondare e ADN-së duhet të rikthehet. Ky proces quhet rinaturim.
Denatyrimi ose shkrirja e ADN-së shoqërohet me një rritje të densitetit optik të tretësirave të ADN-së në një gjatësi vale prej 260 nm. Ky fenomen quhet efekti hiperkromik. Rritja maksimale në densitetin optik të një solucioni të ADN-së gjatë zbërthimit të tij të plotë në mononukleotide në gjatësinë e valës së specifikuar është afërsisht 80%.
Një molekulë e ADN-së e përbërë vetëm nga poli-d(AT) shkrihet në temperatura më të ulëta sesa një molekulë e ADN-së e përbërë nga poli-d(GC). Kjo për faktin se dy lidhje hidrogjenore formohen midis A dhe T, dhe tre lidhje hidrogjenore formohen midis G dhe C.
2. Pika e shkrirjes
Karakteristika më e rëndësishme e ADN-së është temperatura e saj e shkrirjes, e cila korrespondon me temperaturën në të cilën rritja e densitetit optik të një solucioni të ADN-së është e barabartë me gjysmën e rritjes maksimale të saj të vërejtur gjatë denatyrimit të plotë të ADN-së. Temperatura e shkrirjes së ADN-së që përbëhet nga poli-d(AT) është 66 o C, ADN-ja e përbërë nga poli-d(GC) është 85 o C. ADN-ja natyrore ka një pikë shkrirjeje më shumë se 66 o C, por më pak se 85 o C, sepse ato përfshijnë të katër bazat azotike, por në përmasa të ndryshme në organizma të ndryshëm të gjallë. Pra, ADN-ja e njeriut karakterizohet nga një pikë shkrirje e barabartë me 81 - 82 o C, E. coli - 90.5 o C.
Kur tretësira e ADN-së ftohet (pjekohet), struktura sekondare origjinale e ADN-së mund të restaurohet në përputhje me parimin e komplementaritetit.
3. Hibridizimi
Nëse një përzierje e molekulave të ndryshme të ADN-së fillimisht shkrihet dhe më pas pjeket, atëherë nëse ka një ngjashmëri në strukturat e tyre primare, hibridizimi midis molekulave të ADN-së është i mundur.
Figura - Hibridizimi ndërmjet molekulave të ndryshme të ADN-së
Sa më e lartë të jetë ngjashmëria midis molekulave të ADN-së, aq më e lartë është shkalla e hibridizimit. Bazuar në rezultatet e hibridizimit midis ADN-së së llojeve të ndryshme të organizmave të gjallë, mund të gjykohet marrëdhënia e tyre. Sa më e lartë të jetë shkalla e hibridizimit, aq më e ngushtë është marrëdhënia midis specieve të analizuara.
Hibridizimi është gjithashtu i mundur ndërmjet molekulave të ADN-së dhe ARN-së, me kusht që të ketë sekuenca nukleotide homologe.
Figura - Hibridizimi ndërmjet ADN-së dhe ARN-së
4. Acidet nukleike thithin fuqishëm dritën ultravjollcë dhe kjo veti qëndron në themel të përcaktimit të përqendrimit të tyre. Efekti mutagjen i dritës ultravjollcë shoqërohet gjithashtu me të njëjtën veti.
organizimi i ADN-së eukariote
Gjatësia e molekulës eukariote të ADN-së është shumë herë më e madhe se madhësia e qelizës. Për të siguruar rrjedhën e proceseve të ndryshme biologjike, duhet të paketohet siç duhet. Ka disa nivele të ngjeshjes së tij.
1. ADN e zhveshur - është spirale e dyfishtë, diametri i saj është 1,8 nm˸
Një ADN e tillë është tepër e ndjeshme ndaj DNazave, enzimave që hidrolizojnë lidhjet fosfodiesterike.
Vetitë fizike dhe kimike të ADN-së - koncepti dhe llojet. Klasifikimi dhe veçoritë e kategorisë “Vetitë fizike dhe kimike të ADN-së” 2015, 2017-2018.
Struktura e ADN-së
format e ADN-së
Përbërja nukleotide e ADN-së
Shkrirja e ADN-së
topologjia e ADN-së
ADN-ja është një molekulë e përbërë nga dy molekula antiparalele të lidhura me lidhje hidrogjenore sipas parimit të komplementaritetit me formimin e një strukture spirale.
Struktura e ADN-së
Njësia strukturore e zinxhirit të ADN-së është deoksiribonukleozidi, i përbërë nga fosfati, sheqeri deoksiriboz dhe katër nukleotide: adenina (A), citozina (C), guanina (G) dhe timina (T). Në disa fagë, timina zëvendësohet nga Uracil (fag PBS1), i cili zakonisht përfshihet në ARN. Nukleotidet e dy vargjeve të ADN-së lidhen me lidhje hidrogjenore sipas parimit të komplementaritetit: A-T, G-C. purina (2 unaza) -Adeninë, Guaninë pirimidina -Timinë, Citozinë |
dADN=20A; - për purine-12A, për pirimidine-8A |
Në çiftin A-T ka 2 lidhje H, në çiftin G-C janë 3 |
Molekula rrotulluese e ADN-së
Tautomerizmi i bazës
Në heterocikle, protonet e lidhura me azotin mund të kalojnë
në atomet e tjera të azotit ose në atomet e oksigjenit të grupit keto, dhe në tretësirat do të ketë një ekuilibër të strukturave të ndryshme tautomere që transformohen me shpejtësi në njëra-tjetrën.
Si rezultat i transformimeve tautomerike, U dhe G në formën e enolit mund të imitojnë C dhe A gjatë çiftëzimit, ndërsa C dhe A në formën imino mund të imitojnë U dhe G, të cilat mund të çojnë në mutacione në ADN (Fig.).
Ndërveprimi i vënies në lojë
Bazat në zinxhirin e ADN-së shtrihen njëra mbi tjetrën në një pirg, i cili siguron stabilizim shtesë të ndërveprimit zinxhir - grumbullim.
Vlera e ndërveprimit të grumbullimit midis bazave: purinë-purinë>pirimidinë-purinë>pirimidinë-pirimidinë
Në oligo- dhe polinukleotidet, grumbullimi midis bazave ngjitur çon në formimin e një strukture spirale të qëndrueshme me një zinxhir (polyA), ndërsa mungesa e grumbullimit çon në një spirale të çrregullt (polyU)
Energjia e ndërveprimeve të grumbullimit ~ -3 - -15 kcal/mol
Shtylla kurrizore sheqer-fosfat jashtë bazës brenda fosfateve deoksirobozë janë të lidhura me lidhje fosfodiesterike. Grupet OH të fosfatit janë të lidhura
me një grup OH në karbonet 3" dhe 5" të deoksiribozës.
Mospërputhja mund të ndodhë kur timina është në formën e enolit ose citozina është në formën imino.
Modifikimet e nukleotideve
fig.1 Nukleotide të modifikuara[Këngëtarja].
Nukleotidet në ADN mund të pësojnë modifikime: 5-metilcitozinë,
5-hidroksimetilcitozinë, 5-hidroksimetiluracil,
N-metiladeninë. Në ADN-në e disa bakteriofagëve, mono- ose disaharidet janë ngjitur në grupin hidroksimetil të hidroksimetilcitozinës nëpërmjet një lidhje glikozidike. ADN-ja e shumicës së eukariotëve dhe jovertebrorëve të ulët përmban relativisht pak 5-metilcitozinë dhe
N6-metiladeninë. Tek vertebrorët luan metilimi i bazës
një rol të rëndësishëm në rregullimin e shprehjes së gjeneve, ku 5-metilcitozina është më e zakonshme. Treguar, se
më shumë se 95% e grupeve metil në ADN-në e vertebrorëve përmbahen në mbetjet e citozinës të dinukleotideve të rralla CG dhe më shumë se 50% e këtyre dinukleotideve janë të metiluara. Në bimë, 5-metilcitozina mund të gjendet në dinukleotidet CG
dhe trinukleotidet CNG (N – C, A ose T).
Format e ADN-së
| Opsione | B-formë | A-formë | C-formë | formë Z |
| spirale | i djathtë | i djathtë | i djathtë | mëngjarash |
| njësive përsëritni | Hënë 1 | 1 muaj | 1 muaj | 2 muaj |
| mon ne qarkullim | 10,4 | 10,7 | 9.3 | 12 |
| diametri | 23.7A | 25.5 A | 18.4A | |
| rrotullim/hën | 35,9 | 33,6 | 38,7 | 60/2 |
| prirja e monit ndaj boshtit | -1,2 | +19 | -9 | |
| rast. m-y mon përgjatë boshtit | 0,332 nm | 0,23 nm | 0,38 nm | |
| gjatësia e kthesës | 34A | 28A | 31A | 34.4A |
Në studimin e ADN-së me metoda të ndryshme, u konstatua prania e formave të ndryshme të ADN-së të formuara në kushte të ndryshme (përqendrimi i kripës, lagështia), disa prej të cilave janë në gjendje të ekzistojnë në organizmat e gjallë.
Ekzistojnë A, B, C, D, T-familje të formave të ADN-së, të cilat mund të ndahen në nëntipe të ndryshme (C, C"").
B-ADN- gjendja bazë e ADN-së e treguar në kristale dhe në tretësirat ujore.
C-ADN- forma që ekziston në një përqendrim të reduktuar të Na dhe një lagështi 44-66%, nëse GC=31-72%.
A-ADN- kjo formë formohet në hibridet ADN-ARN, prandaj, gjatë transkriptimit, ADN-ja kalon në formën A, në vendin e kontaktit ARN-pol. Kjo formë karakterizohet nga prania e një zbrazëtie të brendshme me një diametër prej 5A.
Z-ADN- forma e majtas Tranzicioni B-->Z lehtësohet nga prania e sekuencës GC-5", e cila është vendi i metilimit në organizma. Sekuenca të tilla në plazmide gjatë mbimbështjelljes ndryshojnë nga B në formë Z.
Në tranzicionin B-->Z, seksioni 11-bp ka një formë kalimtare midis spirales së majtë dhe të djathtë.
Z-ADN u gjet në interbandat e kromozomeve politenike të D. melanogaster.
Polnukleotidi GC-5", duke qenë në formën B, formon nukleozome në përqendrime të ulëta kripe. Në përqendrime të larta të kripës, polinukleotidi GC-5" kalon në formën Z, i cili nuk formon nukleozome.
Format A-, Z nuk mund të ekzistojnë në një tretësirë ujore pa ndikime shtesë (proteina, mbimbështjellje).
D-ADN- Rajonet e pasura me AT të ADN-së së fagut T2, në të cilat citozina zëvendësohet nga 5"-hidroksimetilcitozina, e vetmja ADN natyrale e njohur është në formën D. Përveç kësaj, ADN e fagut është glikoziluar me më shumë se 70%.
Spiralja e dyfishtë e D-ADN-së është më e përdredhur se B-ADN-ja dhe ka një brazdë të vogël të thellë - një zgavër e përshtatshme për ujin dhe kationet.
Strukturat 3D të ADN-së
Lakimi i ADN-së
Përbërja nukleotide e ADN-së
Rregullat e Chargaf
Përbërja nukleotide e ADN-së së disa
organizmave[Këngëtarja].
| Burimi | POR | G | C | T | A+T/G+C | A+G/T+C | G+C, mol.% |
| Bakteriofag λ Bakteriofag T2 Escherichia coli Bacillus subtilis Shoup's papilloma virus Saccharomyces cerevisiae Klamidomonas zogth Miu Lopë Gruri |
26,0 32,5 23,8 29,0 26,6 31,3 19,6 27,9 28,9 27,3 27,2 |
23,8 18,2 26,0 20,7 24,5 18,7 30,2 21,2 21,1 22,5 22,6 |
24,3 16,72 26,4 21,3 24,2 17,1 30,0 21,5 20,3 22,5 22,8 |
25,8 32,6 23,8 29,0 24,7 32,9 |
1,08 1,86 0,91 1,38 1,05 1,79 0,65** 1,34** 1,44** 1,22** 1,20** |
0,99 1,03* 0,99 0,99 1,04 1,00 0,99** 0,96** 1,00** 0,99** 0,99** |
48 35* 52 42 49 36 60** 43** 41** 44** 45** |
* 5-hidroksimetilcitozinë
** duke përfshirë 5-metilcitozinë
Tek eukariotët, frekuenca e shfaqjes së 5"-CG-3" është më e lartë se ajo e 5"-GC-3", sepse dinukleotidi 5"-GC-3" i nënshtrohet metilimit të përfshirë në rregullimin e shprehjes së gjeneve. Në prokariotët, raporti 5'-CG-3'/5'-GC-3' është afër rastit (shih tabelën).
Madhësia e molekulave të ADN-së
Madhësia e ADN-së shprehet në çifte bazash (bp) ose mijëra çifte bazash (bp)
| Burimi | M, po | Gjatësia | e hënë | Lloji i strukturës |
| Bakteriofag φX174 SV40 Bakteriofag T2 Kromozomi i Hemophilus influenzas Kromozom Escherichia coli Saccharomyces cerevisiae Kromozomi 1 Kromozomi 12 Drosophila melanogaster Kromozomi 2 Kromozomi 3 Kromozomi 4 |
1,6 10 6
3,5 10 6 1,2 10 8 7,9 10 8 2,6 10 8 1,4 10 8
4 10 10
|
1.6 μm 1.1 μm 50 μm 300 μm 1 mm 50 μm 15 mm |
5 10 3
5,2 10 3 2 10 5 1,2 10 6 4 10 6 2,1 10 5
6,0 10 7
|
Rrethore një fije floku Fije e dyfishtë rrethore Fije lineare e dyfishtë i panjohur Fije e dyfishtë rrethore Fije lineare e dyfishtë Fije lineare e dyfishtë |
Shkrirja e ADN-së
Denatyrimi ose shkrirja- divergjenca e vargjeve të ADN-së kur ADN-ja nxehet në ~1000C ose kur pH rritet.
Divergjenca e zinxhirëve ndodh për shkak të shkatërrimit të hidrogjenit të dobët
lidhjet dhe ndërveprimet planare ndërmjet bazave.
Në denatyrim ndikojnë edhe: jonet e metaleve mono dhe dyvalente, proteinat që neutralizojnë ngarkesat negative të grupeve fosfate.
Pika e shkrirjes së GC është më e lartë se AT. Për të thyer dy lidhje H të çifteve AT, kërkohet më pak energji sesa për të thyer tre lidhje H të çifteve GC; temperatura dhe vlerat e pH në të cilat ndodh denatyrimi varen nga përbërja nukleotide e ADN-së.
Kurba e shkrirjes së ADN-së
Denatyrimi është një proces i kthyeshëm, restaurimi i mëvonshëm i strukturës së ADN-së me dy zinxhirë mund të ndodhë edhe me divergjencë të plotë të zinxhirëve. Procesi i ribashkimit, i quajtur rinaturim, rishoqërim ose pjekje, ndodh kur
rënie e temperaturës ose pH
Me një ulje të mprehtë të temperaturës ose pH, ribashkimi i saktë i zinxhirëve plotësues është i vështirë për shkak të çiftimit.
bazat e rajoneve lokale plotësuese brenda zinxhirëve të njëjtë ose të ndryshëm.
Rinaturimi i ADN-së ndodh në një temperaturë ~200C nën pikën e shkrirjes.
Gjatë rinatyrimit, seksionet zinxhir me ADN të përsëritur fillimisht lidhen dhe më pas me seksione unike.
Kurba e rinatyrimit të ADN-së
t shkrihet kundrejt konc. kripë
Vetitë e ADN-së
Ultratingulli e pret ADN-në në fragmente të barabarta me gjatësi ~ 500 bp.
ADN-ja është e pazgjidhshme në tretës jopolarë.
Alkali hidrolizon ADN-në.
Për shkak të ngarkesës së grupeve të fosfatit, ADN-ja ka një ngarkesë negative.
Topologjia e molekulave të ADN-së
Literatura:
- Singer: Genes and genomes v.1
- Zenger.V: Parimet e organizimit strukturor të acideve nukleike. M., Mir, 1987
Në vitin 1944, eksperimentet nga Avery, McLeod dhe McCarthy treguan se aftësia për të formuar një kapsulë në një lloj mutant akapsular të pneumokokut mund të rikthehej duke futur në qelizat e tij ADN të pastruar pneumokokale të aftë për të prodhuar një kapsulë. Autorët e quajtën agjentin (ADN) përgjegjës për këtë ndryshim një "faktor transformues". Shumë shpejt, metoda e transformimit u përdor gjerësisht në kërkimin gjenetik. Relativisht kohët e fundit, u kryen eksperimente në të cilat qelizat e majave, qelizat e gjitarëve, embrionet e brejtësve dhe insekteve shërbyen si marrës dhe ADN-ja e klonuar shërbeu si dhurues i informacionit gjenetik.
Vetitë kimike të ADN-së
Natyra kimike e njësive monomerike që formojnë ADN-në (deoksiadenilati, deoksicitidilati, deoksiguanilati dhe timidilati) përshkruhet në kapitullin. 34. Monomet polimerizohen me formimin e lidhjeve 3, 5-fosfodiesterike, duke formuar një varg të vetëm të ADN-së (Fig. 37. 1). Informacioni në ADN shkruhet në formën e një sekuence specifike të deoksiribonukleotideve purine dhe pirimidine.
Molekula polimerike e ADN-së, siç shihet nga figura, është polare. Në njërin skaj është 5-hidroksil - (ose grupi fosfat), në tjetrin 3-fosfat - (ose grup hidroksil). Bazuar në të dhënat e analizës së difraksionit me rreze X të ADN-së dhe rregullit Chargaff, sipas të cilit përmbajtja e mbetjeve të deoksiadenozinës (A) në një molekulë të ADN-së është e barabartë me përmbajtjen e timidinës (T), dhe përmbajtja e deoksiguanozinës (G ) është e barabartë me përmbajtjen e deoksicitozinës (C), Watson, Crick dhe Wilkins të propozuar në fillim të modelit të 50-s të strukturës dyvargjeshe të ADN-së. Modeli i formës B të ADN-së është paraqitur në fig. 37.2. Dy zinxhirët e kësaj molekule me dorën e djathtë dhe me dy fije mbahen së bashku nga lidhjet hidrogjenore të formuara midis bazave purine dhe pirimidine. Formimi i çifteve plotësuese është rreptësisht specifik. A gjithmonë çiftëzohet me (Fig. 37. 3).
Në një molekulë me dy fije, kufizime për shkak të frenimit të rrotullimit rreth lidhjes fosfodiesterike, "autokonfigurimit" mbizotërues të lidhjeve glikozidike (Fig. 34.9) dhe formave tautomere mbizotëruese të katër bazave (A, G, T dhe C , Fig. 34.3) krijojnë kushte në të cilat A mund të formojë një çift të fortë vetëm me T, dhe G vetëm me C (Fig. 37.3). Kjo është ajo që shpjegon rregullat Chargaff (A = T; G = C). Dy fijet e spirales së dyfishtë, duke qenë polare, janë dhe
Oriz. 37.1. Një fragment i strukturës së një molekule të ADN-së në të cilën bazat purine dhe pirimidine adeninën (A), timinën (T), citozinën (C) dhe guaninën (G) mbahen së bashku nga një shtyllë fosfodiesteri që lidh mbetjet -deoksiribozil të lidhura nga një - lidhje glikozidike me bazat nukleike përkatëse. Ju lutemi vini re: shtylla kurrizore e fosfodiesterit të një vargu të vetëm të ADN-së ka "polaritet" (d.m.th., një drejtim i caktuar mund të dallohet në të, për shembull).
antiparalel, pra drejtimi i njërit qark dhe i tjetrit. Një tablo e tillë i ngjan dy rrugëve paralele me trafik të njëanshëm të drejtuar në drejtime të kundërta. Një nga dy vargjet plotësuese të ADN-së, që përmban informacion rreth strukturës së një gjeni të caktuar në formën e një sekuence specifike nukleotide, zakonisht quhet kodues (ose shabllon); zinxhiri tjetër plotësues i tij quhet jo-kodues.
Siç tregohet në fig. 37.3, tre lidhje hidrogjenore formohen midis mbetjeve të deoksiguanozinës dhe deoksicitidinës, dhe vetëm dy midis timidinës dhe deoksiadenozinës. Prandaj, lidhja G-C është më e fortë me rreth 50%. Kjo rrethanë, si dhe ndërveprimet e grumbullimit, mund të shpjegojnë temperaturën më të lartë të denatyrimit (shkrirjes) të rajoneve të pasura me GC të ADN-së.
Struktura e ADN-së
ADN-ja mund të formojë disa lloje spiralesh të dyfishta. Aktualisht, gjashtë forma janë tashmë të njohura (nga forma A në E dhe Z). Shumica e varianteve strukturore të ADN-së mund të ekzistojnë vetëm në kushte eksperimentale të kontrolluara rreptësisht. Këto opsione ndryshojnë 1) në numrin e çifteve të bazave për një rrotullim të spirales së dyfishtë; 2) largësia ndërmjet rrafsheve të çifteve të bazave dhe këndit që ato formojnë me boshtin e spirales; 3) diametri i spirales; 4) orientimi (djathtas, majtas) i spirales së dyfishtë (Tabela 37. 1).
Disa nga këto forma ndryshojnë në njëra-tjetrën me ndryshime në përqendrimin e kripës dhe shkallën e hidratimit. Është e mundur që kalimet ndërmjet formave të ndryshme strukturore të ADN-së të ndodhin gjithashtu in vivo.
Oriz. 37.2. Modeli i Watson dhe Crick i strukturës së spirales së dyfishtë në formë B. Majtas: Paraqitja skematike e një molekule (A - adeninë, C - citozinë, G - guaninë, T - timinë, P - fosfat, S-sheqer [deoksiriboz]). Djathtas: Modeli i strukturës së ADN-së. (Fotografi nga J.D. Watson, Molecular Biology of the Gene ed. 3rd. Copyrght 1976, 1970, 1965 nga W. A. Benjamin, Inc., Menlo Park, Calif.)
Në kushte fiziologjike (përqendrimi i ulët i kripës, shkalla e lartë e hidratimit), lloji strukturor mbizotërues i ADN-së është forma B. Lartësia e spirales së një molekule të tillë është 3.4 nm. Një spirale ADN-je mund të përfaqësohet si dy pirgje të përdredhura "monedhash", 10 në secilën. Pirgjet mbahen së bashku me lidhje hidrogjeni midis dy "monedhave" të kundërta të pirgjeve dhe janë "mbështjellë" me dy shirita të një shtylle fosfodiesteri të përdredhur në një spirale të djathtë. Në kushtet e hidratimit më pak të lartë dhe me një përmbajtje më të lartë të joneve Na + ose K +, lind një strukturë paksa e ndryshme - e ashtuquajtura formë A. Ky konformacion i dorës së djathtë ka një diametër më të madh spirale se forma B dhe një numër më të madh çiftesh bazash për kthesë. Është e ngjashme me strukturën karakteristike të duplekseve të ARN-së me dy zinxhirë ose ARN-ADN-së. Format C-E janë gjithashtu të djathta, formimi i tyre mund të vërehet vetëm në eksperimente të veçanta dhe, me sa duket, ato nuk ekzistojnë in vivo.
formë Z. ADN-ja është një spirale e dyfishtë e majtë, në të cilën shtylla kurrizore e fosfodiesterit është zigzag përgjatë boshtit të molekulës. Prandaj emri i molekulës (zigzag)-ADN. Z-ADN është më pak e përdredhur (12 çifte bazash për kthesë) dhe më e holla e njohur në natyrë, ajo ka vetëm një brazdë (shih më poshtë). Z-ADN zbulohet në sekuenca të përsëritura të deoksinukleotideve të alternuara purine dhe pirimidine (GC ose AC) në prani të një numri faktorësh të tjerë stabilizues. Këto përfshijnë: 1) një përqendrim të lartë të kripës ose praninë e kationeve specifike si spermina dhe spermidina; 2) një përmbajtje e lartë e superbobinave negative në molekulën e ADN-së (shih Kapitullin 38); 3) lidhja e proteinave specifike të Z-ADN-së; 4) metilimi i atomit të karbonit-5 të disa mbetjeve të deoksicitidinës.
ADN-ja në formën Z mund të përfshihet në rregullimin e shprehjes së gjeneve të vendosura afër dhe dukshëm të largëta nga zona Z. Disa proteina që lidhen në brazda të mëdha ose të vogla të ADN-së në formë B, ka të ngjarë të mos jenë në gjendje të lidhen me formën Z të ADN-së. Për më tepër, kthimi i një seksioni të ADN-së nga forma Z në formën B të ADN-së, e cila ndodh, për shembull, si rezultat i humbjes së grupeve metil nga β-metildeoksicitidina. mund të ndikojë në statusin e rrotullimit të segmenteve të ADN-së të vendosura në një distancë të konsiderueshme nga zona e kthimit.
Oriz. 37.3. Formimi i dy lidhjeve hidrogjenore (vija e ndërprerë) midis bazave të deoksiadenozinës dhe timidinës (lart) dhe tre lidhjeve hidrogjenore midis bazave deoksiguanozine dhe deoksicitidine (poshtë). Në ADN, mbetja e karbohidrateve është 2-deoksiribozë; në ARN, D-riboza
ADN-ja me përdredhje-zbërthim të përdredhjes, si dhe metilimi i deoksicitidinës, ndoshta ndikon në aktivitetin e gjeneve (shih më poshtë).
Prania e Z-ADN-së në kromozomet e Drosophila (miza e frutave) është treguar duke përdorur antitrupa specifikë për formën Z të ADN-së. Ka rajone në ADN-në e njeriut që janë potencialisht të afta të transformohen në formën Z; ato shpërndahen në gjenom.
Tabela 37.1. Karakterizimi i disa llojeve të strukturave të ADN-së
Ka arsye për të besuar se kushtet e nevojshme për stabilizimin e formës Z mund të realizohen edhe në qelizat njerëzore.
Denatyrimi (shkrirja) e ADN-së
Struktura e dyfishtë e ADN-së mund të "shkrihet" në tretësirë duke rritur temperaturën ose duke ulur përqendrimin e kripës. Gjatë shkrirjes, jo vetëm që zinxhiri i ADN-së ndryshon, por edhe sistemi i ndërveprimeve të grumbullimit të bazave nukleike brenda këtij zinxhiri prishet. Lidhjet fosfodiesterike nuk prishen në këtë rast. Denatyrimi i ADN-së shoqërohet me një rritje të përthithjes optike të bazave purine dhe pirimidine. Ky fenomen quhet efekti hiperkromik i denatyrimit të ADN-së. Denatyrimi eliminon gjithashtu viskozitetin e lartë të natyrshëm në tretësirat e ADN-së vendase, struktura e ngjashme me fibrat e së cilës është për shkak të ndërveprimeve të grumbullimit të bazave nukleike në çdo varg dhe ndërveprimeve plotësuese midis dy vargjeve.
Ndarja e zinxhirëve të një molekule të caktuar të ADN-së ndodh brenda një diapazoni të caktuar të temperaturës. Pika e mesit e këtij intervali quhet pika e shkrirjes së ADN-së ose . Vlera varet nga përbërja nukleotide e ADN-së dhe përqendrimi i kripës në tretësirë. Molekulat e ADN-së të pasuruara në çifte G-C (ato janë të lidhura me tre ura hidrogjeni) "shkrihen" në një temperaturë më të lartë se molekulat e pasura me A-T (çiftet A-T lidhen me dy ura hidrogjeni). Një rritje dhjetëfish në përqendrimin e kationeve monovalente rritet me 16,6 ° C. Formamide, e përdorur zakonisht në eksperimentet me ADN-në rekombinante, destabilizon lidhjet hidrogjenore midis bazave, duke reduktuar kështu . Kjo lejon që vargjet e ADN-së ose hibridit ADN-ARN të ndryshojnë në një nivel më të ulët, gjë që zvogëlon gjasat e prishjes së vargut individual në temperaturë të lartë.
brazda në strukturën e ADN-së
Kur studioni modelin e treguar në Fig. 37.2, mund t'i kushtohet vëmendje pranisë në strukturën e ADN-së të brazdave kryesore dhe të vogla, të përdredhura rreth boshtit të molekulës paralele me shtyllën kurrizore të fosfodiesterit. Në këto brazda, proteinat mund të ndërveprojnë në mënyrë specifike me atome të caktuara të bazave nukleike dhe, për rrjedhojë, "të njohin" sekuenca specifike nukleotide pa shqetësuar ndërveprimet plotësuese në strukturën e spirales së dyfishtë. Siç do të tregohet në kapitullin. 39 dhe 41, është përmes ndërveprimeve të tilla që proteinat rregullatore mund të kontrollojnë shprehjen e gjeneve.
ADN e relaksuar dhe e mbimbështjellur
ADN-ja e disa organizmave, si bakteret, bakteriofagët dhe shumë viruse të ADN-së së kafshëve, është një strukturë rrethore e mbyllur. Sigurisht, një strukturë e tillë nuk cenon polaritetin e molekulave, por grupet e lira dhe hidroksil dhe fosforil zhduken në të. Unazat e mbyllura mund të ekzistojnë në forma të relaksuara ose të mbimbështjellura. Mbështjellja shfaqet kur një unazë e mbyllur rrotullohet rreth boshtit të vet ose kur një pjesë e ADN-së lineare është e përdredhur, skajet e së cilës janë të fiksuara. Ky proces që kërkon energji çon në shfaqjen e një tendosjeje intramolekulare të strukturës. Me një rritje të numrit të superbobinave, stresi i brendshëm (përdredhje) rritet (kontrollojeni këtë në një brez gome të zakonshme). Mbështjelljet në ADN të formuara nga përdredhja në drejtim të kundërt të akrepave të orës (në drejtim të kundërt të përdredhjes së spirales së dyfishtë të djathtë të formës B të ADN-së) quhen negative. Në njëfarë kuptimi, mund të supozojmë se energjia e nevojshme për të arritur një gjendje të tillë strukturore ruhet në superbobina të zakonshme (jo negative). Energjia e kalimit të një molekule të ADN-së në një lloj tjetër të strukturës supramolekulare mund të reduktohet për shkak të formimit të rajoneve të kthesës negative. Një tranzicion i tillë është ndarja e fijeve në përgatitje për replikim dhe transkriptim. Kjo është arsyeja pse mbimbështjellja e ADN-së është shumë e dobishme në sistemet biologjike. Enzimat që katalizojnë ndryshimet topologjike në molekulën e ADN-së quhen topoizomeraza. Më e studiuara prej tyre është gyraza bakteriale, e cila nis formimin e superbobinave negative.
Funksioni i ADN-së
Informacioni gjenetik i koduar në një sekuencë nukleotide shërben për dy qëllime. Së pari, është e nevojshme për sintezën e molekulave të proteinave, dhe së dyti, siguron transferimin e vetvetes në një seri brezash qelizore dhe brezash organizmash. Të dy funksionet mbështeten në faktin se molekula e ADN-së shërben si shabllon; në rastin e parë për transkriptimin - rikodimin e informacionit në strukturën e molekulave të ARN-së dhe në rastin e dytë për replikimin - kopjimin e informacionit në molekulat e ADN-së së bijës.
Komplementariteti i vargjeve të spirales së dyfishtë Watson dhe Crick sugjeron një mënyrë gjysmë konservatore të replikimit të ADN-së. Kjo do të thotë se zinxhirët ndryshojnë dhe secili shërben si një shabllon për sintezën e një sekuence të re plotësuese (Fig. 37.4). Dy molekulat e ADN-së me dy zinxhirë që rezultojnë, secila prej të cilave përbëhet nga një prind dhe një varg plotësues i saposintetizuar, shpërndahen midis dy qelizave bija (Fig. 37.5). Kështu, secila prej qelizave bijë merr informacion identik me atë që zotëron qeliza mëmë. Secila nga dy qelizat bijë ruan një varg të ADN-së origjinale prindërore.
Mekanizmi gjysmë konservator i replikimit në bakterin Escherichia coli u demonstrua pa mëdyshje në eksperimentin klasik nga Meselson dhe Stahl duke përdorur një izotop të rëndë të azotit në kombinim me centrifugimin ekuilibër.
Oriz. 37.4. Struktura e dyfishtë e ADN-së. Secila nga dy vargjet e molekulës mëmë të ADN-së përdoret si shabllon për sintezën e vargjeve të reja plotësuese. (Nga J. D. Watson. Biology Molecular of the Gene ed. 3rd. E drejta e autorit 1976, 1970, 1965 nga W. A. Benjamin, Inc., Menlo Park,
Oriz. 37.5. Shpërndarja e pritshme e vargjeve të ADN-së në replikimin gjysmë konservativ dhe konservativ. Në figurë, zinxhirët mëmë janë të zinj dhe zinxhirët e rinj janë të lehta. (Rivizatuar dhe riprodhuar, me leje nga Lehninger A. L. Biochemistry 2nd. ed., Worth, 1975.)
ADN-ja e E. coli dhe ADN-ja e njeriut janë kimikisht identike, megjithëse, natyrisht, sekuencat e tyre nukleotide janë të ndryshme, dhe përveç kësaj, një qelizë njerëzore përmban rreth 1000 herë më shumë ADN sesa një bakteriale. Doli se mekanizmi kimik i replikimit të ADN-së është i njëjtë tek prokariotët, si E. coli, dhe eukariotët, përfshirë njerëzit, pavarësisht se enzimat e përfshira në këto procese ndryshojnë në qelizat prokariote dhe eukariote. Ka çdo arsye për të besuar se të dhënat e marra në studimin e kimisë së acideve nukleike të organizmave prokariote janë gjithashtu të zbatueshme për sistemet eukariote. Në të vërtetë, rezultatet e eksperimenteve me qelizat e gjitarëve të ngjashme me ato të Meselson dhe Stahl rezultuan të krahasueshme me të dhënat e marra më parë për E. coli.
Nëse tretësirat e ADN-së virale ose bakteriale nxehen ngadalë, atëherë molekulat e tyre denatyrohen në temperatura mjaft të caktuara (Fig. 27-16). Kalimi nga dupleksi vendas i ADN-së në formën e papërdredhur, të përdredhur rastësisht, të denatyruar mund të zbulohet nga një rritje në thithjen e dritës ultravjollcë ose nga një ulje e viskozitetit të tretësirës së ADN-së. Çdo lloj ADN-je ka temperaturën e vet të denatyrimit, të quajtur "pika e shkrirjes". Sa më e lartë të jetë përmbajtja e çifteve G=C në ADN, aq më e lartë është pika e shkrirjes së kësaj ADN-je. Kjo shpjegohet me faktin se çiftet GC janë më të qëndrueshme dhe kërkohet më shumë energji për shpërbërjen e tyre sesa për shkatërrimin e çifteve A=T; kjo është pjesërisht për shkak të faktit se çiftet G=C lidhen me tre lidhje hidrogjenore, dhe çiftet A=T vetëm me dy.
Përcaktimi i kujdesshëm i pikës së shkrirjes së një preparati të ADN-së në kushte të fiksuara të pH dhe forcës jonike mund të sigurojë informacion mbi raportin e çifteve A=T dhe G=C në ADN.
Vetia e dytë fizike e ADN-së, e përcaktuar nga raporti i çifteve G=C dhe A=T, është dendësia e lëvizjes. Preparati i ADN-së me përmbajtje më të lartë G=C-nap ka një densitet pak më të lartë se ADN-ja me përmbajtje më të lartë të çifteve A=T. Përgatitjet e ADN-së centrifugohen me shpejtësi të lartë në një tretësirë të koncentruar të klorurit të ceziumit (), dendësia e të cilit qëndron në të njëjtin diapazon me densitetin e ADN-së.
Oriz. 27-15. Parimi i testit të hibridizimit. Dy preparate të ADN-së të izoluara nga organizma të llojeve të ndryshme ngrohen në mënyrë që ato të denatyrohen plotësisht dhe zinxhirët e tyre ndryshojnë. Kur këto preparate përzihen dhe ftohen ngadalë, vargjet plotësuese të ADN-së të secilës specie do të gjejnë njëra-tjetrën dhe do të pjekja për të formuar duplekse normale. Nëse ka homologji domethënëse në sekuencë midis dy ADN-ve, atëherë formimi i molekulave hibride, të cilat janë duplekse të pjesshme, është i mundur. Sa më e lartë të jetë shkalla e homologjisë, aq më shumë gjasa është formimi i hibrideve. Përmbajtja e hibrideve në një përzierje mund të matet në mënyra të ndryshme, veçanërisht me anë të kromatografisë ose centrifugimit të gradientit të densitetit. Zakonisht, për të thjeshtuar procedurën e matjes, një nga ADN-të etiketohet me një izotop radioaktiv.
Oriz. 27-16. Kurba e denatyrimit (shkrirjes) e dy preparateve të ADN-së. Temperatura që korrespondon me pikën e mesme të tranzicionit quhet pika e shkrirjes. Meqenëse vlera varet nga pH dhe përqendrimi i kripës, është gjithmonë e nevojshme të specifikohen kushtet për matjen e saj.
Gjatë centrifugimit në një tub centrifuge, formohet një gradient densiteti me densitetin më të lartë në fund të tubit. Nëse ADN-ja vendoset në të, atëherë ajo fillimisht do të lëvizë drejt fundit të epruvetës, por më pas do të ndalet në një pozicion të caktuar dhe do të qëndrojë në det. Në këtë pozicion, ai as nuk mund të ngrihet dhe as të vendoset, pasi dendësia e zgjidhjes këtu është e barabartë me densitetin e saj. Me këtë metodë, e cila është përshkruar më hollësisht në kap. 28, është e mundur të ndahen molekulat e ADN-së që ndryshojnë në përmbajtjen e çifteve G=C nga njëra-tjetra, pasi ato kanë dendësi të ndryshme lëvizëse. Bazuar në densitetin e lëvizjes së kësaj ADN-je, ne mund të llogarisim raportin e çifteve G=C dhe A=T në të.
Hibridizimi i ADN-së
Hibridizimi i ADN-së, hibridizimi i acidit nukleik- lidhje in vitro plotësojnë acidet nukleike me një fije floku në një molekulë. Me komplementaritet të plotë, kombinimi është i lehtë dhe i shpejtë, dhe në rastin e mosplotësimit të pjesshëm, bashkimi i zinxhirëve ngadalësohet, gjë që bën të mundur vlerësimin e shkallës së komplementaritetit. Hibridizimi i ADN-ADN-së dhe ADN-ARN-së është i mundur.
Protokolli i eksperimentit
- ADN-ja me dy zinxhirë ngrohet në një tampon të përshtatshëm. Për shkak të ndryshimeve në kushtet e jashtme, lidhjet hidrogjenore midis bazave plotësuese azotike bëhen termodinamikisht të pafavorshme dhe zinxhirët ndryshojnë.
- Preparati i ADN-së së denatyruar përzihet me ADN tjetër të denatyruar.
- Përgatitjet ftohen ngadalë, ndërsa ADN-të me një fije floku kalohen me njëra-tjetrën (ndërmjet bazave plotësuese krijohen lidhje hidrogjenore) dhe formohet një molekulë "hibride" e ADN-së.
Një analizë e shkallës së pjekjes së ADN-së me një zinxhir bën të mundur vlerësimin e ngjashmërive dhe dallimeve në sekuencat e ADN-së midis specieve ose individëve të së njëjtës specie.
Llogaritja e pikës së shkrirjes së ADN-së
Struktura dytësore e ADN-së luan një rol të rëndësishëm në biologji, diagnostifikim gjenetik dhe metoda të tjera të biologjisë molekulare dhe nanoteknologjisë. Prandaj, përcaktimi i saktë i pikës së shkrirjes së molekulave të ADN-së ose ARN-së luan rolin më të rëndësishëm në të gjitha metodat biologjike molekulare, siç është zgjedhja e mostrave ose oligonukleotideve për mikrogrumbullimet ose përzgjedhja e primerëve PCR. Ekzistojnë disa formula të thjeshta për llogaritjen e pikës së shkrirjes për oligonukleotidet e shkurtra. Llogaritja e përafërt e pikës së shkrirjes (Tm) të një oligonukleotidi të shkurtër (<20 нуклеотидов) проводят по прямому подсчету количества нуклеотидов (G+C - сумма всех гуанинов и цитозинов , L - длина олигонуклеотида):
Formula mesatare për llogaritjen e T m për një oligonukleotid të shkurtër (dhe për fragmente të gjata të ADN-së), duke marrë parasysh përqendrimin e joneve K + dhe DMSO:
Sidoqoftë, këto ekuacione nuk marrin parasysh fillimin e lidhjes gjatë hibridizimit të oligonukleotideve, nuk marrin parasysh veçoritë e vetë sekuencës dhe efektin përfundimtar karakteristik të duplekseve oligonukleotide. Prandaj, kjo formulë është më e përshtatshme kur sekuenca e ADN-së është mesatare dhe gjatësia e duplekseve është mbi 40 nukleotide.
Termodinamika e ADN-së
Metoda më e zakonshme e përdorur sot për të llogaritur temperaturën e shkrirjes së ADN-së me dy fije ose një fije floku bazohet në një model termodinamik me dy hapa. Dy molekula plotësuese të ADN-së A dhe B janë ose të lidhura me njëra-tjetrën ose të lira në tretësirë ("gjendja e spirales së rastësishme"). Zakonisht supozohet se të dy molekulat A dhe B janë plotësisht plotësuese, kështu që hibridizimi i tyre është i dukshëm dhe lejohen një ose më shumë gabime të komplementaritetit në dupleks, duke përfshirë çiftet G-G, G-T dhe G-A jo-plotësuese (çifte luhatëse). Në rastin e vetëm një molekule, ajo supozohet ta paketojë atë në një strukturë lak. Procesi i hibridizimit në dupleks përshkruhet me formulën:
ku A dhe B janë zinxhirë të ndryshëm në tretësirë ("gjendje e rastësishme spirale"), dhe AB është dupleksi i formuar. Ky reagim është i kthyeshëm. Konstanta e ekuilibrit k, për këtë reaksion përcaktohet si: .
Konstanta e ekuilibrit varet nga përqendrimi i zinxhirit, temperatura, përqendrimi i kripës, pH dhe komponentët e tjerë në reaksion (p.sh. glicerina ose DMSO). Konstanta K ndryshon në përgjigje të një ndryshimi në përqendrimin e njërit ose të dy zinxhirëve ( dhe / ose ), atëherë i gjithë sistemi i përgjigjet ndryshimeve dhe më pas përqendrimet individuale të [A], [B] dhe gjithashtu ndryshojnë. Për shembull, nëse ka më shumë zinxhir A në sistem, atëherë përqendrimi do të rritet. Supozoni se konstanta e ekuilibrit është 1.81x10 6 dhe përqendrimi i zinxhirëve = = 10 -5 M:
Ne i zëvendësojmë komponentët në formulat për llogaritjen e k:
Pas riorganizimit, marrim:
Për shembull, duke zëvendësuar në këtë formulë = 7.91x10 -6 M atëherë përqendrimi i zinxhirëve do të jetë [A] = [B] = 2.09x10 -6 M. Kjo do të thotë, vetëm 79% e zinxhirëve do të lidhen në dyfish.
A është e mundur të përcaktohen konstantet e ekuilibrit me një ndryshim të temperaturës? Kjo na sjell në kuptimin e parametrave të rëndësishëm termodinamikë si energjia e lirë (dG), entalpia (dH) dhe entropia (dS). Ndryshimet në energjinë e lirë, entalpinë dhe entropinë ndodhin gjatë kalimit nga "temperatura e hibridizimit T" në një gjendje të çrregullt, të rastësishme. Këto raporte përcaktohen me formulën dG = dH – TdS , (për përqendrimin e zinxhirëve [A] = [B] = = 1M), atëherë formula ideale për llogaritjen e energjisë së lirë të Gibbs është:
ku T është temperatura në kelvin, dH° (cal/mol) dhe dS° (cal/mol K).
Ekziston një lidhje e dobishme që lidh ndryshimin në energjinë e lirë të Gibbs-it gjatë një reaksioni kimik me konstanten e tij të ekuilibrit:
ku R është konstanta universale e gazit (1,987cal/mol K).
Duke kombinuar të dyja formulat marrim:
Temperatura e shkrirjes (T m) përcaktohet në ekuilibër, kur gjysma e zinxhirëve janë të lidhur me njëri-tjetrin dhe gjysma tjetër është në gjendje të lirë, pra k=1:
Pika e shkrirjes për një lak të thjeshtë llogaritet si . Për dupleksin e ADN-së, është e nevojshme të merret parasysh përqendrimi i secilës varg (në mol, M). Kështu, nëse [A] dhe [B] janë përqendrimet e molekulave A dhe B, atëherë përqendrimi total i zinxhirëve, C, është i barabartë me shumën e tyre, [A] + [B].
Supozohet se përqendrimi i të dy zinxhirëve është i njëjtë [A] = [B] = C/2. Në këtë rast,
ku f = 4. Për një oligonukleotid vetëplotësues = C dhe pastaj f = 1. Kjo temperaturë shkrirjeje përcaktohet vetëm kur gjysma e molekulave janë të lidhura me njëra-tjetrën.
Për një oligonukleotid vetë-plotësues, k = 1/ prandaj:
Për një dupleks jo plotësues, kur ≥ , k =1/( – /2), Tm llogaritet si më poshtë:
ku është përqendrimi molar i vargut mbizotërues (zakonisht një primer PCR) dhe [Bt] është përqendrimi molar i vargut me përqendrim të ulët (ADN gjenomike).
Llogaritja e pikës së shkrirjes
Parametrat termodinamikë dG, dH dhe dS llogariten në bazë të modelit të fqinjit më të afërt. Parashikimi i saktë i strukturës dytësore të ADN-së gjatë hibridizimit duke përdorur algoritme programimi dinamik kërkon një bazë të dhënash të të gjithë parametrave termodinamikë të mundshëm për çdo palë bazë plotësuese, si dhe për të gjitha mospërputhjet, skajet e lira, shiritat e flokëve dhe sythe. Formula termodinamike për llogaritjen e një oligonukleotidi të shkurtër bazohet në parametrat termodinamikë - entropia dS dhe entalpia dH, për secilin nga 10 kombinimet e katër nukleotideve (Tabela 1). Tabela 1 tregon parametrat termodinamikë për fqinjët më të afërt (NN) për çiftet nukleotide në një përqendrim prej 1M NaCl.
Për të llogaritur Tm (°С), të gjitha vlerat e energjisë së lirë të Gibbs për çdo çift përmblidhen në rritje të një nukleotidi:
dG e përgjithshme = dG fillestar + dG simetri +∑dG + dG AT fund
dG teorike = 1,96 + 0 - 2,17 - 1,44 - 1,44 - 1,00 - 1,45 - 1,30 +0,05
dG teorike = -5,35 kcal/mol
Vlerat e entropisë (dH = -43,5 kcal/mol) dhe entalpisë (dS = -122,5) llogariten në mënyrë të ngjashme:
Shumë duplekse të ADN-së kanë struktura konkurruese me një fije floku, dhe kjo ndryshon ekuilibrin e sistemit dhe, si rezultat, një rënie në vlerën T m nga vlera e parashikuar nga formula.
Formula e përgjithshme për llogaritjen e T m me korrigjim për kripën në tretësirë është:
ku L është gjatësia e oligonukleotidit, R është konstanta e gazit (1,987cal/K mol), c është përqendrimi i oligonukleotidit në (zakonisht 2x10-7 M), është përqendrimi i joneve të kaliumit në mol (zakonisht 5x10- 2 M).
| Sekuenca e çifteve (5"-3"/3"-5") |
° kcal/mol |
° cal/(mol K) |
° 37 kcal/mol |
|---|---|---|---|
| AA/TT | -7.6 | -21.3 | -1.00 |
| AT/TA | -7.2 | -20.4 | -0.88 |
| TA/AT | -7.2 | -20.3 | -0.58 |
| CA/GT | -8.5 | -22.7 | -1.45 |
| GT/CA | -8.4 | -22.4 | -1.44 |
| CT/GA | -7.8 | -21.0 | -1.28 |
| GA/CT | -8.2 | -22.2 | -1.30 |
| CG/GC | -10.6 | -27.2 | -2.17 |
| GC/CG | -9.8 | -24.4 | -2.24 |
| GG/CC | -8.0 | -19.9 | -1.84 |
| fillimin | +0.2 | -5.7 | +1.96 |
| çift terminali A-T | +2.2 | +6.9 | +0.05 |
| korrigjimi i simetrisë | 0.0 | -1.4 | +0.43 |
Gabim i vetëm brenda dupleksit
Modeli i fqinjit më të afërt për çiftet nukleotide plotësuese mund të zgjerohet në çifte që përfshijnë nukleotide jo plotësuese. Është treguar se ka një tendencë në rënie në stabilitetin e çifteve të bazave jo plotësuese në rend zbritës:
G-C > A-T> G G > G T ≥ G A > T T ≥ A A > T C ≥ A C ≥ C C
Guanidina G është baza më "promiskuoze" sepse formon çifte të forta bazash me baza jo plotësuese (G·G, G·T dhe G·A). Nga ana tjetër, citozina C është baza më diskriminuese sepse formon çiftet plotësuese më të qëndrueshme dhe çiftet e paqëndrueshme me baza jo plotësuese (T·C ≥ A·C ≥ C·C), .
Lidhjet
Shiko gjithashtu
- PrimerDigital: mjete online për analizën e PCR dhe oligonukleotideve
